Изучение зависимости гибели клеток М. smegmatis от времени взаимодействия с хитозаном

Для изучения зависимости гибели клеток микобактерий от времени взаимодействия их с крабовым хитозаном Mrj от 4 и 24 кДа и СД 85% и хитозаном из восковой моли с Mq 11 кДа и СД 89% пробы отбирали через 10,30, 60 и 120 минут (рис.7).

Рис.7. Гибель клеток М. smegmatis (% от общего количества клеток) при взаимодействии с хитозанами при 37°С и pH 6,8 в зависимости от времени экспозиции (мин); 1-хитозан Mq 4 кДа, 2- хитозан Mq 11 кДа, 3- хитозан Mq

24 кДа.

Было показано, что достаточно 10 мин контакта хитозана с культурой М. smegmatis, чтобы 38-60% клеток потеряли жизнеспособность. Кроме

в концентрации 0,1% и хитозаном из восковой моли Galleria mellonella с Мц от 7-177 кДа и СД 89% в концентрации 0,1%, pH 6,8 на качалке при температуре 37°С в течение 1 ч на качалке. После этого пробы титровали и высевали на чашки Петри с питательной средой. В качестве контроля брали бактерии, не обработанные хитозаном. По истечении 72 часов инкубации определяли количество КОЕ. Результаты гибели М. smegmatis представлены на рисунке 6.

ММ, кДа

Рис.6. Влияние хитозанов с различной Мц на гибель клеток М. smegmatis (% от общего количества клеток) через 1 ч при 37 °С и pH 6,8; а - крабовый хитозан, б - хитозан из восковой моли.

На рис.6 видно, что процент гибели клеток М. smegmatis после 60 мин экспозиции при 37°С и pH 6,8 составлял 0-76% в зависимости от Мц испытанных образцов хитозана. Наименьшей чувствительностью тестируемый штамм обладал к высокомолекулярным образцам хитозана с Мц 96 и 177 кДа. В случае их действия гибель клеток микобактерий составляла 29% и 13%, соответственно. Высокомолекулярный крабовый хитозан с Мц 396 кДа в концентрации 0,1 % не обладал антибактериальным действием. Максимальной активностью в отношении клеток микобактерий обладали низкомолекулярные хитозаны с Мц 4-11 кДа, процент гибели

клеток достигал 76%. Необходимо отметить, что тенденция увеличения антибактериальной активности хитозанов с уменьшением их Mq сохранялась и при взаимодействии клеток М. smegmatis с образцами хитозана восковой моли.

Таким образом, на основании результатов проведенных опытов можно сделать вывод о том, что препараты низкомолекулярного хитозана краба с Мг| от 4-24 кДа и СД 85% и низкомолекулярные хитозаны восковой моли с Мг| 7 и 11 кДа и СД 89% эффективно действуют на клетки М. smegmatis, вызывая, практически, их полную гибель.

3.2.3.